细胞培养是生命科学研究的基础实验技术之一，而HGC-27（人胃癌细胞系）作为一种常用的肿瘤研究模型，广泛应用于药物筛选、肿瘤机制研究等领域。然而，由于HGC-27细胞贴壁生长特性及对培养条件的高敏感性，操作稍有不慎便可能导致细胞状态下降甚至死亡。 一、HGC-27细胞的基础知识 在正式实验前，了解细胞的基本特性是成功培养的关键： •细胞来源：HGC-27源自人未分化胃癌组织，贴壁生长，形态多为不规则梭形或多角形。 •培养基要求：推荐

免疫荧光技术是生命科学领域的“明星”实验手段，凭借其高分辨率和多色标记能力，被广泛应用于蛋白定位、共表达分析等研究中。然而，许多科研人在实验中常遇到一个令人头疼的问题——串色（Crosstalk ）。明明标记了红色和绿色荧光，显微镜下却一片模糊，信号混杂难辨…… 别让串色毁了你的实验结果！今天我们就来深入解析串色的成因，并分享5个实用解决方案。 一、串色是怎么发生的？ 串色，简单来说就是不同荧光通道的信号互相干扰。

小分子量蛋白（<100 kDa） - 甲醇浓度：维持在20%。 - 原因：小分子量蛋白从凝胶转移到膜上相对轻松，较高的甲醇浓度能够有效地打破SDS与蛋白的结合，推动蛋白与膜相结合。 大分子量蛋白（>100 kDa） - 甲醇浓度：建议降至10% 或者更低。 - 原因：大分子量蛋白在凝胶中的迁移与转移较为迟缓，并且容易在凝胶内产生沉淀，而甲醇会促使SDS从蛋白上脱离，进而引发蛋白沉淀。降低甲醇浓度能够减少蛋白沉淀的情况，同时促使凝胶膨胀，有利于大分子

一、实验步骤 1.细胞固定： 首先检查细胞的传代情况。打开含有预置细胞爬片的细胞培养板，在每个孔中滴加适量组织固定液，固定细胞15分钟。之后，用超纯水洗涤孔板3到4次，去除固定液残留，确保细胞的洁净。 2.细胞破膜：使用组化笔在细胞分布均匀的区域画圈，以防止抗体流失。随后加入3毫升破膜液，室温下孵育20分钟。破膜后，用PBS缓冲液洗涤三次，每次5分钟，彻底去除破膜液。 3.血清封闭：在标记的圈内均匀滴加由牛血清蛋白配制的3% BSA

PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）是一种分子生物学技术，用于在生物体外快速、大量地复制特定的DNA片段。尽管PCR实验的原理和操作流程看似简单，但实际操作中却存在许多潜在的问题。以下是一些常见的PCR实验问题及相应的解决方案。 01拖尾、弥散现象 • 可能原因：体系配置偏差（如酶用量、dNTP、镁离子浓度过高）、扩增循环数过多、PCR体系中存在污染、电泳缓冲液不净、电压不稳定、退火时间不当、模板不纯等。 • 解决方案：减少

Ethidium Homodimer-1 (EthD-1)主要用于染色死细胞。它与细胞核结合后，可发出红色荧光，常用于检测细胞的死亡状态。 （1）Ethidium Homodimer-1是一种高亲和性的荧光核酸染料，与DNA或RNA结合后，可以使荧光增强30多倍。 （2）由于带有较强正电荷，所以该染料不能穿过细胞膜进行活细胞染色，但是可以准确的检测溶液中的核酸或者解体细胞中的核酸，是一种较灵敏的核酸染色剂。 （3）此外EthD-1可与钙黄绿素AM联合使用，分别染色死细胞和活细胞，从而判断细

一、细胞凋亡 正常细胞的磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine，简称PS）仅存在于质膜双层内侧。细胞凋亡初期，膜脂质对称性消失，PS由内侧翻转至外侧，暴露于细胞表面。Annexin V，一种36kDa的钙依赖性磷脂结合蛋白，对PS具有高度亲和力。因此，利用荧光标记的Annexin V可检测早期凋亡细胞表面暴露的PS。 细胞凋亡中后期或坏死时，因细胞膜破裂，Annexin V能进入细胞与质膜PS结合。为区分活细胞、早期凋亡细胞及中晚期凋亡（或坏死）细胞，可联合使用荧光

深入审视近年来细胞研究领域的动态，不难注意到一个术语频繁浮现——外泌体。随着对外泌体探索的热度不断攀升，这一领域已成为全球科学家竞相研究的焦点，相关研究成果也如雨后春笋般涌现，并频频刊登于《科学》、《自然》等国际顶尖学术期刊。 一、外泌体是什么？ 外泌体（exosomes）是一种由脂质双层膜构成的微小囊泡，通过内吞途径产生，胞吐作用释放，直径在30-100nm之间，形状为球形。外泌体作为细胞外囊泡（extracellular vesicles, EVs）的

在Western Blotting实验中，将目标蛋白高效地从凝胶转移至印迹膜上，是实验成功的关键一环。这一过程需要根据样品特性和目标蛋白的性质进行细致优化。以下是我们精心总结的六大策略，旨在帮助你提高WB转印效率。 1. 精选转印方式 首先，需根据实验需求选择最适合的转印方式。湿转，适用于广泛分子量范围的蛋白转印，膜与胶完全浸没在转印缓冲液中。半干转，则更适用于30-120kD范围内的蛋白，且转印速度更快，缓冲液仅覆盖膜与滤纸。而快速半

一、细胞凋亡 正常细胞的磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine，简称PS）仅存在于质膜双层内侧。细胞凋亡初期，膜脂质对称性消失，PS由内侧翻转至外侧，暴露于细胞表面。Annexin V，一种36kDa的钙依赖性磷脂结合蛋白，对PS具有高度亲和力。因此，利用荧光标记的Annexin V可检测早期凋亡细胞表面暴露的PS。 细胞凋亡中后期或坏死时，因细胞膜破裂，Annexin V能进入细胞与质膜PS结合。为区分活细胞、早期凋亡细胞及中晚期凋亡（或坏死）细胞，可联合使用荧光

关于生化检验 一、生化检验概述 生化检验是基于探究生物体健康与疾病状态下的生物化学过程变迁，运用物理学、化学、生物学、病理学、免疫学及生物化学的理论与技术，通过测定生物体血液、尿液、脑脊液等样本中化学物质的量与质的变迁，为科研者提供疾病确诊、病情监控、疗效观测、预后评估及健康评判等信息，最终判定受检者是否存在潜在疾患或排除某些疾患、揭示疾病变迁及药物治疗对机体生物化学过程影响的一种技术途径。 二、生化

关于生化检验 一、生化检验概述 生化检验是基于探究生物体健康与疾病状态下的生物化学过程变迁，运用物理学、化学、生物学、病理学、免疫学及生物化学的理论与技术，通过测定生物体血液、尿液、脑脊液等样本中化学物质的量与质的变迁，为科研者提供疾病确诊、病情监控、疗效观测、预后评估及健康评判等信息，最终判定受检者是否存在潜在疾患或排除某些疾患、揭示疾病变迁及药物治疗对机体生物化学过程影响的一种技术途径。 二、生化

WB 技术颇具挑战性，尤其是磷酸化蛋白的 WB 检测，更是困难重重！这是因为细胞裂解后，蛋白酶和磷酸酶会被释放出来，它们可能会降解或修饰蛋白质，进而对检测结果产生影响。那么，我们该如何应对呢？ 首先看下磷酸化蛋白的作用都有哪些？ 细胞信号传导研究：检测激酶活性和磷酸化蛋白的变化，研究细胞内信号通路的激活或抑制。 疾病机制研究：例如，在癌症研究中，磷酸化蛋白的异常变化可能与肿瘤发生、发展和转移相关。 药物研发：检

荧光素酶报告基因（Luc）系统，依托荧光素为底物，巧妙检测萤火虫荧光素酶活性。此酶能催化荧光素氧化为oxyluciferin，过程中释放生物荧光，成为研究热点。 荧光素酶家族庞大，能催化多样底物发光，而哺乳细胞却无此内源酶。其中，细菌荧光素酶因热敏性在哺乳细胞研究中受限；萤火虫荧光素酶则凭借高灵敏度、宽检测范围（7-8个数量级），成为哺乳细胞研究的首选，尤其适合高通量筛选。更值得一提的是，新型萤火虫荧光素酶无需细胞裂解即

ELISA（酶联免疫吸附测定）实验常见标本的采集处理及保存方法对于确保实验结果的准确性和可靠性至关重要。以下是对血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液、组织匀浆液以及尿液、唾液等其他液体生物样本的采集处理及保存方法的详细介绍。 PART 01样本的收集与处理01血清 • 收集：使用无热原、无内毒素的试管或离心管采集静脉血。 • 处理：将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜，使血清析出。随后，在4℃条件下以1000×g离心20分钟，仔细收

在科学实验领域，小鼠无疑是科研人员不可或缺的“得力助手”，但其饲养管理却颇为复杂，任何突如其来的疾病或死亡都可能对实验结果造成显著影响。鉴于小鼠的自我调节与疾病抵抗能力相对较弱，掌握恰当的饲养方法对于科研人员而言至关重要。 1、生活环境调控 小鼠对温度有着严格的适应范围，其耐受极限为低温10℃至高温37℃，而最适宜的温度区间则为30～33℃。为了确保小鼠的健康，饲养环境需维持以下标准：温度应控制在18～29℃之间，相

自主荧光，指的是在组织或细胞样本进行荧光检测时，所产生的与目标信号无关的背景荧光信号。 解决自主荧光问题主要有两种途径：一是选用冰冻切片进行染色，二是减弱石蜡切片染色中的自主荧光。 本文将重点探讨：如何降低免疫荧光染色实验中石蜡切片的自主荧光。 一、石蜡切片的特性 01 石蜡切片厚度可达3微米，实验过程中组织损耗较小 在利用普通小鼠、基因敲除小鼠等小型动物进行实验时，我们经常需对同一组织进行病理学及分子生物学

在细胞培养环节，血清确保了细胞的顺利生长与分裂。血清内富含各类蛋白质、氨基酸、激素等必需成分，部分成分是细胞自身无法合成的。此外，血清还蕴含众多未知的细胞生长因子、附着促进因子及其他活性物质，这些都有助于细胞的生长、分裂和附着，并具备抗胰酶特性。在细胞培养中，牛血清与马血清最为常用，其中小牛血清、胎牛血清和新生牛血清的应用尤为广泛。 为什么血清在解冻后会出现絮状沉淀？如何处理？ 血清中出现絮状沉淀的

自主荧光，指的是在组织或细胞样本进行荧光检测时，所产生的与目标信号无关的背景荧光信号。 解决自主荧光问题主要有两种途径：一是选用冰冻切片进行染色，二是减弱石蜡切片染色中的自主荧光。 本文将重点探讨：如何降低免疫荧光染色实验中石蜡切片的自主荧光。 一、石蜡切片的特性 01 石蜡切片厚度可达3微米，实验过程中组织损耗较小 在利用普通小鼠、基因敲除小鼠等小型动物进行实验时，我们经常需对同一组织进行病理学及分子生物学

这部分的写作需注意以下几方面： 一）要介绍国外动态，更要介绍国内研究情况 很多人写文章喜欢引用外国人的文献，而不注意国内同行的工作，标书写作中也经常出现类似问题。如此以来，容易使评审专家认为申请人对国内研究情况不了解，最终以“不了解国内情况”为由，不同意资助。 二）国内情况应包括申请人自己的研究工作 有的申请人只介绍别人的工作，却忽视了对自己的工作的介绍。有人认为后边的研究基础中会介绍自己的工作，这里

培养液是通过人工方式，将微生物所需的各种养分混合而成的营养环境，它为微生物的繁衍提供了必要的营养和生存条件。 消毒与灭菌的方法，大体上可以分为四大类别： 1. 热力消毒：涵盖直接火焰消毒、干热消毒、高压蒸汽消毒、分段消毒以及沸水消毒； 2. 过滤除菌； 3. 辐射消毒与灭菌； 4. 化学消毒剂消毒与灭菌。 本实验将介绍培养液与玻璃器具消毒中部分常用的消毒方法。 1. 干热消毒法（热空气消毒） 干热消毒通常利用电热烘箱作为消毒设

流式细胞术 (Flow Cytometry, FCM) 是一种在液流中快速检测细胞特性的技术。它通过将单个细胞与特异性抗体结合，对细胞进行多参数定量分析，包括细胞表面标记、细胞内蛋白质表达、细胞周期、DNA含量等。流式细胞术具有高通量、高灵敏度、高特异性等优点，广泛应用于免疫学、血液学、肿瘤学等领域。 流式细胞术的工作原理 在流式细胞仪中，细胞被包裹在鞘液 (sheath) 中，通过喷嘴以一定的速度射出。当细胞依次通过激光束时，激光束会照射到细胞

在免疫组化的石蜡包埋法制片过程中，甲醛固定处理会导致相邻蛋白质间形成亚甲基桥结构，这种结构会阻止抗体与抗原表位的特异性结合，产生抗原掩蔽效应，导致某些抗原染色效果不佳甚至无法染色。为了逆转这种效应，需要进行抗原修复处理。 热诱导抗原修复法 01实验原理 热诱导抗原修复法通过在一定温度的抗原修复液中对组织切片进行适当时间的加热处理，使蛋白质处于水相环境中，加热加速蛋白水解过程，从而打开因固定交联而形成的化

一、污染防控措施 在执行PCR操作时，操作人员需严格遵循既定规程，以最大化减少乃至消除PCR过程中的污染风险。 01 操作区域划分： 尽管当前常规PCR操作难以实现全程单人单管的完全封闭作业，但无论条件如何，均须确保实验在三个独立区域内分阶段完成，且PCR的前处理与后处理需严格隔离： 样本制备区：专用于扩增模板的准备工作； PCR扩增区：涵盖反应体系的配制及PCR扩增过程； 产物分析区：负责凝胶电泳分析、产物成像及重组克隆的操作。

在进行免疫荧光实验时，常见的问题包括：背景漆黑、光点散乱、高背景染色及模糊，目标蛋白荧光微弱且组间差异不显著，以及荧光过强导致的非特异性标记。其实针对这些问题解决起来并不难，我们可以从以下几个方面着手优化： 一、优化灌流取材 拍摄时发现的血管状非特异性染色，往往源于灌流不彻底，动物体内血液残留。以小鼠心脏灌流为例，应先用预冷1×PBS彻底灌流至血液排尽，再灌注4%多聚甲醛溶液至小鼠僵直。随后，将组织置于4℃的4

一、细胞增殖与细胞周期 细胞增殖是生物体生长和组织修复的关键机制，涉及细胞周期的不同阶段，包括G1期（DNA合成前期）、S期（DNA复制期）、G2期（DNA合成后期）和M期（有丝分裂期）。细胞周期的精确调控对于维持生命和正常生物体功能至关重要。 二、Cyclin蛋白家族概述 Cyclin是一类能够周期性地表达和降解的蛋白质，通过与周期蛋白依赖性激酶（CDKs）组成复合物，在细胞周期的不同阶段起着关键的调控作用。Cyclin蛋白家族包含多个不同亚型的

单平台睡眠剥夺方法： 单平台睡眠剥夺方法最早由Jouvet等开发并用于猫的REM睡眠剥夺，后续经过Cohen等的修改用于剥夺大鼠的REM睡眠。该方法将一个狭窄平台（直径6.5cm）放置在长40.0cm×宽34.0cm×高16.0cm的水槽中，往水槽中加水至平台下1.0cm。将1只大鼠置于狭窄平台上，当进入REM睡眠阶段时，动物会失去肌肉张力并接触水，从而觉醒。对照组通常是笼养对照动物或在完全相同的环境条件下将大鼠放置在宽平台上（直径14.0cm）。这种方法因为使动物受到了

全自动步态分析系统在实验动物研究中具有重要的应用价值，尤其是在神经科学、药理学、遗传学以及生物医学工程等领域。使用全自动步态分析系统时，通常需要将动物放置在一个特制的通道内自由行走，系统会记录下它们的步伐长度、宽度、速度、足底压力分布等多个参数。通过对这些定量的步态数据的分析，研究人员可以获得关于实验动物运动协调性、平衡能力和肌肉力量等方面的信息，帮助研究人员评估实验处理（如疾病模型建立、药物干预